在生物学实验中，大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见且重要的模式生物。它被广泛用于分子生物学、遗传学以及微生物学研究中。由于其生长迅速、易于培养和基因组已完全测序，因此成为实验室中最常用的菌种之一。本文将介绍大肠杆菌的基本培养方法，帮助初学者掌握这一基础技能。

一、培养前的准备

在进行大肠杆菌培养之前，需要准备好以下材料：

- 无菌培养基：如LB液体培养基或LB固体培养基（含琼脂）

- 无菌操作工具：接种环、移液枪、无菌试管、培养皿等

- 菌株来源：可从实验室菌种库获取或使用标准菌株（如E. coli DH5α）

- 恒温培养箱：用于细菌的适宜温度培养（通常为37℃）

此外，所有操作应在无菌环境中进行，以避免杂菌污染。

二、液体培养法

1. 制备培养基

将LB液体培养基按照说明书配制好，并分装至无菌试管或三角瓶中。通常每管约5–10 mL。

2. 接种菌种

使用无菌接种环从菌种平板上挑取少量菌落，轻轻涂布于液体培养基中，盖紧瓶口。

3. 培养

将接种后的培养基放入恒温培养箱中，设置温度为37℃，培养12–16小时。期间可定期观察菌液的浑浊度变化。

4. 保存菌液

若需长期保存，可在培养后加入甘油（终浓度为15%），并置于-80℃冰箱中保存。

三、固体培养法

1. 制备平板

将LB固体培养基加热融化后倒入无菌培养皿中，冷却凝固形成平板。

2. 划线接种

使用无菌接种环蘸取菌液，在平板表面进行划线操作，使菌体分散开来，便于单菌落的形成。

3. 培养

将平板倒置放入37℃恒温培养箱中，培养12–24小时，待出现清晰的菌落。

4. 挑取菌落

可从平板上挑取单个菌落用于后续实验，如质粒提取或转化等。

四、注意事项

- 所有操作应尽量在超净工作台内完成，确保无菌环境。

- 接种时动作要轻柔，避免污染。

- 培养过程中注意观察是否有异常菌落或污染现象。

- 实验结束后，废弃的培养物应妥善处理，避免环境污染。

五、总结

大肠杆菌的培养是许多生命科学研究的基础步骤。通过掌握正确的培养方法，可以为后续的基因克隆、蛋白表达、突变分析等实验提供稳定的菌源。对于初学者而言，熟悉无菌操作和培养条件是成功的关键。随着实践的积累，能够更加熟练地进行各类相关实验。